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不同产地山茱萸药材质量的检测

【摘要】
目的检测河南不同产地山茱萸药材质量。方法《中国药典》法测定山茱萸药材的水浸出物、醇浸出物、水分测定、灰分测定,高效液相法测定马钱素和莫若苷的含量。结果不同产地山茱萸药材的水分、酸不溶性灰分部分样品高于《中国药典》规定;水浸出物、醇浸出物、灰分和马钱素含量均达到《中国药典》标准。结论 不同产地山茱萸药材的质量不同,所购河南市售样品除水分、灰分外,基本符合《中国药典》规定。

山茱萸作为我国传统珍稀药材和临床常用名贵中药,应用越来越广,种植山茱萸的药材基地也越来越多,导致市场上山茱萸的质量参差不齐,所以对山茱萸药材的质量控制就显得越来越重要。山茱萸主产于河南西峡、浙江临安、淳安、安徽、陕西汉中等地。以河南西峡产量最大,质量最好,为道地药材。本实验对河南省内各个不同产地的山茱萸药材进行质量检测。现报道如下。

1  器材

1.1  仪器BS210S型电子天平;FW-100高速万能粉碎机;GS101-2D电热恒温鼓风干燥器;振荡器; SXZ-4-10型马福炉;KQ-500DV 型 数控超声清洗器干燥器。

1.2  试剂乙醇、醋酸乙酯、甲酸、甲苯、无水乙醇为分析纯;乙腈、甲醇为色谱级;娃哈哈纯净水;熊果酸、莫诺苷、马钱素对照品均由中国药品生物制品检定所提供。

1.3  药材山茱萸药材购自河南不同产区,经河南中医学院生药学科陈随清教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis sieb.et Zucc.

2  方法与结果

2.1  薄层鉴别取本品粉末0.5 g,加乙酸乙酯10 ml,超声处理15 min,滤过,滤液蒸干,残渣加无水乙醇2 ml使溶解,作为供试品溶液。另取熊果酸对照品,加无水乙醇制成每毫升含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[1]试验,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的紫红色斑点;置紫外光灯(365 nm)下检视,显相同的橙黄色荧光斑点。

2.2  水分、灰分、酸不溶灰分及浸出物含量测定[1]结果见表1。 表1  山茱萸药材水分、灰分、酸不溶灰分及浸出物含量测定结果(略)

2.3  马钱苷与莫诺苷含量测定

2.3.1  色谱条件ODS-C18色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm大连依利特分析仪器有限公司),乙睛水(15∶85)为流动相,检测波长240 nm,流速1 ml·min-1,柱温25℃  。

2.3.2  对照品溶液的制备  精密称取马钱素对照品0.88 mg和莫诺苷对照品1.22 mg置10 ml容量瓶中,加80%甲醇,溶解,定容,0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。

2.3.3  供试品溶液的制备[2]取山茱萸生品及酒制品(常压、加压)的粉末(过3号筛)各约0.1 g,精密称定,加80%甲醇25 ml,称定重量,加热回流1 h,放冷,用80%甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,0.45 μm微孔滤膜,即得。

2.3.4  标准曲线的绘制取对照品溶液1, 3, 5, 7 ,9μl ,分别注入高效液相色谱仪中,按上述色谱条件测定。以峰面积积分值为纵坐标,对照品含量为横坐标,绘制标准曲线。计算马钱素和莫诺苷的回归方程分别为Y=743 157X-40 535,r=0.999 6,Y=950 012X-45 581。r=0.999 6:。结果表明马钱素在0.088~0.792 μ围内线性良好,莫诺苷在0.122~1.098 μg范围内线性良好。
2.3.5  稳定性实验分别在0,2,4,6,8,12 h手动进马钱素对照品溶液5 μl,照前述色谱条件测定峰面积积分值计算马钱素和莫诺苷RSD值分别为RSD=2.65%,RSD=1.62%。结果表明马钱素和莫诺苷在12 h内稳定性良好,。

2.3.6  精密度实验连续手动进样马钱素对照品5 μl,按前述条件测定峰面积积分值,计算马钱素和莫诺苷RSD值分别为RSD=2.01%,RSD=1.33%,结果表明精密度良好。

2.3.7  重复性实验称取山茱萸同一样品粗粉5份各约0.1 g,精密称定,按照上述供试品溶液制备方法和色谱条件,制备供试品溶液并注入高效液相色谱仪,测定峰面积积分值,计算马钱素和莫诺苷RSD值分别为RSD=1.01%,RSD=1.89%,结果表明重现性良好。

2.3.8  加样回收率实验取5种已知马钱素含量的山茱萸粉末约0.05 g各1份,精密称定,按0.05 g山茱萸粉末所含马钱素及莫诺苷的量精密加入马钱素和莫诺苷对照品,按供试品溶液制备项下操作,得到5份加样回收供试液。自动进样各加样回收供试液10 μl,注入液相色谱仪,测定,用外标法根据峰面积积分值进行计算,结果马钱素平均加样回收率99.08 %,RSD=2.04%;莫诺苷加样回收率100.17%,RSD=1.28%。

2.3.9  含量测定取各供试品溶液分别手动进样10μl,测定马钱素和莫诺苷峰面积值,计算样品含量。结果见表2。表2  市售不同产地山茱萸药材马钱素、莫诺苷含量数据(略)

2005版《中国药典》规定山茱萸按干燥品计算,含马钱苷不得少于0.60%。从测出的数据结果表明,不同产地的山茱萸马钱素含量有差异,平均在0.76%~1.48%之间变化,大部分合格。其中以河南巩义产的山茱萸含量最高为1.48%,河南郏县产的山茱萸含量最低为0.76%。2005版《中国药典》没有规定山茱萸莫诺苷的含量。但从测出的数据结果表明,不同产地的山茱萸莫诺苷含量有差异,平均在1.05%~1.83%之间变化,均高于马钱素的含量。

3  讨论

理化鉴别在薄层色谱中,9份样品与对照品色谱相应的位置上,显相同的紫红色斑点;置紫外光灯(365 nm)下检视,显相同的橙黄色荧光斑点且10个点均在同一直线上。说明不同产地山茱萸均含有熊果酸 。 

水分和灰分检查结果证明9份不同产地山茱萸药材水分含量大部分不符合《中国药典》规定,只有嵩县、白云山、实验室陈品的山茱萸水分含量合格。总灰分检测结果均为合格,说明没有其他无机物污染和掺杂。酸不溶性灰分检测结果大部分合格,郏县和嵩县产的山茱萸超过《中国药典》标准。

不同产地的山茱萸中马钱素含量有差异,但均符合《中国药典》要求。不同产地的山茱萸中莫诺苷含量有差异,平均在0.886%~1.0875%之间变化,其中以河南南阳产的山茱萸含量最高为1.14%,以河南郏县产的山茱萸含量最低为0.64%。药典没有作具体规定,但实验表明山茱萸莫诺苷含量较高,甚至比马钱素还高,而且莫诺苷也是山茱萸主要活性成分之一,所以笔者认为莫诺苷也应该成为考察山茱萸质量优劣项目之一。

【参考文献】
[1]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:20.

[2]蔡宝昌,刘训红.常用中药材HPLC指纹图谱测定技术[M].北京:化学工业出版社,2005:42
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